實驗目的:根據(jù)用戶實驗需求,此次實驗選用小鼠皮下黑色素瘤單細胞為樣品,對其樣品進行單細胞懸液的制備。
實驗選用儀器:溫控型單細胞懸液制備儀JX-CKSM-6WK
制備單細胞懸液的實驗步驟:
1.在實驗開始前,我們需要提前準備好單細胞制備儀JX-CKSM-6WK一臺,溫和型消化酶,終止液和洗滌管
2.在實驗前,需要先將消化液和終止液冷水慢慢解凍,不可加熱,不可劇烈搖晃;解凍后的消化酶和終止液放在冰上待用
3.選取健康小鼠1只,斷頸處死,打開腹腔,取出腫瘤,放置冰塊上
4.將其取出的樣品組織放在培養(yǎng)皿中,用1XPBS洗滌器官等樣品組織
5.將選取的組織塊用眼科剪剪成糊狀。(在一個干凈的皿中放入1ml左右消化液,將我們?nèi)∠碌男K放進去剪成糊狀,然后用移液槍將消化液和糊狀樣本放入消化管中)再將管中消化液補充滿
6.開啟實驗儀器,將其樣品管放入單細胞制備儀的管架上,管架預熱5分鐘
7.選擇模塊1進行實驗,實驗結束后儀器自動停止
8.流式分析或者單細胞測序用40um濾網(wǎng)、細胞培養(yǎng)可用70um-100um較粗一些的濾網(wǎng)過濾,加入終止液終止消化(消化液:終止液1:2)。管子放在冰上過濾
9.過濾后的懸液放到離心機上重懸(230g離心力,離心7分鐘)
10.重懸后棄掉上清,加入少量DPBS打散混勻底部沉淀細胞,該懸液即單細胞懸液
實驗注意事項:
1.組織一定要現(xiàn)取
2.取完組織后放到冰上保證細胞活性
小鼠腫瘤組織單細胞懸液的制備效果: