在單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒?yàn)操作中,很多都是需要從各種生物樣本細(xì)胞中制備細(xì)胞懸液;而針對不同的生物樣本類型,如何獲取到活性高、完整性好、結(jié)團(tuán)率低的單細(xì)胞懸液,這是單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。那對于小鼠肝腎脾樣品的細(xì)胞懸液實(shí)驗(yàn)操作該如何進(jìn)行呢?
實(shí)驗(yàn)設(shè)備:單細(xì)胞懸液制備儀 JX-CKSM-48WK
小鼠肝腎脾樣品的細(xì)胞懸液制備實(shí)驗(yàn)過程:
1.打開儀器開關(guān),打開加熱模塊,加熱
2.取活體組織后,放入PBS液中去紅,然后取20-50mg,分成6-8等分
3.用移液器把消化酶加入2ml的研磨套裝管中,將加滿消化酶的離心管放入預(yù)熱模塊中預(yù)熱3-5分鐘
4.將處理好的組織用鑷子轉(zhuǎn)移到加滿消化酶的離心管中
5.將裝有消化酶和組織的離心管放置到加熱板中,選擇25分鐘程序,開始運(yùn)行
6.程序結(jié)束取出離心管,將消化好的組織液轉(zhuǎn)移到過濾管中,即得到一管單細(xì)胞懸液
小鼠肝腎脾樣品細(xì)胞懸液制備實(shí)驗(yàn)前后對比效果圖:
樣品懸液制備的實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存。
2、消化酶解凍時(shí)需在常溫條件下解凍,不可以放入水浴或者其他加熱儀器中解凍,溫度升高對酶的活性會有很大的影響。
從新鮮組織中制備高活性和高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序至關(guān)重要的一步,很多單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)折戟在此。常見的問題諸如細(xì)胞活性低,細(xì)胞背景不干凈,細(xì)胞碎片多,細(xì)胞結(jié)團(tuán)率高等。科研者單細(xì)胞懸液制備儀具有組織高利用率、單細(xì)胞化過程高效、細(xì)胞活性高的特點(diǎn),常應(yīng)用于流式細(xì)胞術(shù)/單細(xì)胞測序/原代細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)。