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　　在腫瘤免疫學實驗研究領(lǐng)域，組織樣本單細胞懸液制備是單細胞測序?qū)嶒炛兄陵P(guān)重要的工作，其質(zhì)量好壞直接影響了后續(xù)建庫的成敗以及測序數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量。因此，單細胞懸液制備除了需要有經(jīng)驗豐富的人員來進行指導/操作，還得依靠靠譜的單細胞懸液制備儀來助力。

　　實驗設(shè)備：單細胞懸液制備儀 JX-CKSM-6WK

　　應用領(lǐng)域：腫瘤研究、心血管研究、干細胞研究、免疫研究、神經(jīng)科學研究

　　大鼠腫瘤組織樣品的實驗操作過程：

　　01組織獲取、清洗

　　1.荷瘤鼠麻醉后處死，取腫瘤組織200-500 mg，迅速置于裝有4 ℃不含血清的培養(yǎng)液或PBS的無菌培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放置冰上快速拿回實驗室。(一小時內(nèi)分離腫瘤細胞)。

　　2.上述組織使用含有1 %雙抗的PBS洗滌三次，眼科剪去除組織塊中的脂肪、壞死組織等無用組織。

　　02酶消化、機械分離

　　1.用剪刀將組織切割成1-2 mm3左右的小塊，用4℃ D-Hank's液洗1次，盡量去除剪碎組織過程中產(chǎn)生的組織碎片。

　　2.樣品管內(nèi)加入200-500 mg組織及消化酶，放入單細胞懸液儀，選擇內(nèi)置程序運行。

　　3.消化完成后，適當震蕩樣品管，觀察渾濁度與顏色，并用細胞篩過濾出單細胞懸液，隨后加入消化終止液，得到細胞懸液。

　　03洗滌和重懸（選擇性去紅）

　　1.如有大量紅細胞污染，加入紅細胞裂解液（自備）裂紅，230-250 g離心后加入PBS重懸，隨即230-250 g離心洗滌并培養(yǎng)基重懸。

　　2.結(jié)果：單細胞懸液應當保持95 %以上活率（PI染色流式或臺盼藍染色鏡檢），總數(shù)目在3×107左右。

　　實驗操作流程圖：

　　大鼠腫瘤組織樣品處理的實驗前后對比效果圖：

　　實驗解決的問題：

　　從組織獲得存活單細胞是一個復雜過程，處理當中常存在處理時間長、細胞處于逆境狀態(tài)時間長、細胞得率低、細胞存活率低、操作繁瑣等問題。使用JX-CKSM-WK系列單細胞懸液制備儀，具有起始組織量小，時間短，細胞得率高，細胞活性高的特點；常應用于流式細胞術(shù)/單細胞測序/原代細胞培養(yǎng)等實驗。