當(dāng)實(shí)體組織被分散成單細(xì)胞時(shí),分離方法可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的性質(zhì)產(chǎn)生瞬時(shí)或持續(xù)的影響,例如,表面可見的細(xì)胞膜損傷,細(xì)胞表面會(huì)出現(xiàn)泡狀現(xiàn)象,以及線粒體活性很難觀察到的變化,蛋白質(zhì)的丟失等等狀況,而細(xì)胞的損傷則受許多因素的影響,比如溫度,pH,處理時(shí)間等等。那對(duì)單細(xì)胞懸液制備方法有哪些?
酶消化法是實(shí)體組織向單細(xì)胞分散的主要方法之一。常見的酶有:鏈霉蛋白酶,胃蛋白酶,中性蛋白酶,胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,溶菌酶,彈性蛋白酶等,所使用的酶可以根據(jù)分散的組織類型進(jìn)行確定。 但需注意其使用條件和影響因素,胃蛋白酶在堿性環(huán)境下會(huì)失去活性,胰蛋白酶在中性溶液中活性會(huì)缺失等。
酶的原理有三個(gè)主要的方面:破壞組織間的膠原纖維,彈性纖維等,水解組織細(xì)胞與結(jié)構(gòu)緊密結(jié)合的蛋白,水解粘多糖的組織細(xì)胞。
細(xì)胞組織在酶消化法下的操作:
1、在離心管中放置適合進(jìn)行酶消化的組織。
2、向含有消化組織的試管中加入1~2ml選定的酶溶液。
3、在恒溫37攝氏度的環(huán)境中常規(guī)消化20~30min,間歇振蕩或吹氣消化。
4、收集細(xì)胞懸浮物,用尼龍網(wǎng)過濾,去除細(xì)胞,低速離心去除細(xì)胞碎片。
5、加入2ml的pbs攪拌均勻,離心丟棄并清除。然后再加入0.5毫升的PBS使細(xì)胞重懸。
6、熒光標(biāo)記后,制備好的單細(xì)胞懸液將被檢測或儲(chǔ)存以備后用。
其實(shí)對(duì)于單細(xì)胞懸液制備方法還有很多,今天小編給你們列舉的只是其中之一。你還知道哪些有關(guān)于單細(xì)胞進(jìn)行懸液制備的方法呢,不如在評(píng)論中來給我們一起分享啊。