單細(xì)胞的高通量微液滴測序Drop-seq技術(shù)是可分析數(shù)千個單細(xì)胞的快速應(yīng)用方法,可將各細(xì)胞包裹在納升級微滴中,進(jìn)行RNA雜交生成mRNA轉(zhuǎn)錄物,進(jìn)行后續(xù)的測序分析。
液滴微流控Drop-Seq技術(shù)的應(yīng)用可將細(xì)胞懸浮液與帶有分子條形碼的微珠懸浮液泵匯合并形成層流,再與油相匯合形成單層流,然后再通過與油液相混合形成單分散的微滴,包裹住細(xì)胞和小球,完成核糖核酸的雜交,分解微滴,釋放核糖核酸雜交物,制備細(xì)胞基因表達(dá)譜,進(jìn)一步分析mRNA逆轉(zhuǎn)錄的來源。
單細(xì)胞高通量微液滴測序的操作方法:
1.準(zhǔn)備樣品:從組織中分離細(xì)胞,制備細(xì)胞浮游液的分子條形碼的微珠浮游液。
2.制備微滴:將細(xì)胞浮游液和微珠浮游液泵送到芯片上,與油聚集形成單分散的微滴,將各細(xì)胞和微珠一起包裹在同一微滴中進(jìn)行測序。
3.細(xì)胞RNA的雜交:裂解微滴內(nèi)的細(xì)胞,會釋放出其mRNA,并與其分子條形碼進(jìn)行雜交。
4.分子細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄:分解微滴,釋放mRNA的雜交,開始逆轉(zhuǎn)錄,形成mRNA的逆轉(zhuǎn)錄STAMPS。
5.PCR的擴(kuò)張:在核酸外切酶的作用下,將各mRNA的逆轉(zhuǎn)錄像物切斷,用PCR擴(kuò)張核酸,擴(kuò)大其基因信息。
6.序列分析:使用各種生物信息工具對其進(jìn)行序列分析測序。
液滴微流控制程序可通過快速分離微小體積樣品,從而實現(xiàn)對數(shù)千個細(xì)胞的平行高通量分析,通常每秒可以產(chǎn)生1000個微滴,每個微粒的體積只有1nL,降低了實驗成本。